- Qual teste molecular você solicitaria?
- Nome do Exame: Sequenciamento no Método de Sanguer do Gene CFTR.
- Metodologia: Geralmente a mutação do gene CFTR ocorre no cromossomo 7, sendo necessária a prole herdar tal cromossomo mutado do pai e da mãe, visto que é uma doença autossômica recessiva. A mutação ocorre devido à delação de três bases no éxon 10.
- O NGS é mais utilizado para tamanhos de DNA maiores para sequenciar
- Realizou PCR das regiões específicas do éxon 10 e 11 (mutações mais frequentes para a doença)
- Realizou o Sequenciamento pelo Método de Sanguer (melhor custo-benefício)
- O NGS detecta as duas possíveis cópias alteradas ou não alteradas do indivíduo
- O NGS detecta o genótipo do indivíduo
- Por sequenciar os dois éxons 10 e 11 completos, por terem as 3 mutações mais prevalentes, consegue consegue analisar as possíveis mutações neles, mas não em outros genes
- Realizou PCRs separadas, pois, apesar dos éxons 10 e 11 estarem adjacentes, há íntrons entre eles, os quais são muito grandes e não necessários para sequenciar
- Região flanqueadora: regiões adjacentes dos éxons (regiões codificadoras), ou seja, as regiões de íntrons próximos
- Regiões de conexão de íntrons e éxons são conservadas nos genes (final dos íntrons em contato com o final dos éxons é fixo)
- A mutação pode estar no íntron, o que pode causar um corte equivocado da maquinaria, que identifica região de conexão
- Possui também o início e o final não traduzido, que não formam códons, ou UTR
- O sequenciamento foca nos éxons (os íntrons são muito grandes e não codificantes)
